Enzymkatalysert+Konsentrasjonsmåling

=Enzymkatalysert Konsentrasjonsmåling=

 //Definisjon:// Enzymkatalysert konsentrasjonsmåling er når en enzymkatalysator blir tilsatt en løsning slik at den bestemte kjemiske reaksjonen blir påskyndet, uten at enzymet(E) blir forbrukt eller endret. Dermed kan det skje en kvantitering av substratene(S) og produktene(P) vil bli målt fotometrisk. (1)  S  + E --> E S --> P  + E  Figur 1: Reaksjon med enzymkatalysator

Enzymkatalysert konsentrasjonsmåling blir brukt under analyse av for eksempel kolesterol i serum på Pentra 400. Ved tilsetting av enzymer i prøven får vi et reaksjonsforløp, vist på figur 2. Fram til første punktet på reaksjonsforløpet blir prøven blandet med reagenser. Etter første punkt til andre punkt på reaksjonsforløpet, har vi en tilnærma lineær linje. Det er fordi her er enzymet tilsatt, og det er mange substrater og enzymer ledige, slik at reaksjonen går fort. Dette området kalles for 0.ordensfasen. Fra andre punkt til tredje punkt på reaksjonsforløpet krummer kurven ettersom det er mindre substrater igjen i prøven, som skal omdannes, dermed tar det lengre tid før reaksjonen skjer. Dette området kalles for 1.ordensfasen. Etter det tredje punktet på reaksjonsforløpet kommer likevektsfasen. I likevekstfasen har all substratet blitt omdannet til produkter, og dermed får vi en konstant absorbans. Dette er det som skjer ved bruk enzymkatalysator for å øke reaksjonshastigheten. (1)



Metoden som blir brukt for å beregne konsentrasjonen av prøven, for eksempel kolesterol i serum på Pentra 400, er endepunktavlesning, men kinetisk avlesning blir også brukt på andre analyser. Endepunktavlesning går ut på det blir avlest to ganger i løpet av reaksjonen. Første absorbansavlesningen er ved T0 og den siste absorbansavlesning er ved Tn. Det vil si at den avleser først prøveblank, og deretter når det har oppstått en likevekt, altså all substrat har blitt omdanna. Årsaken til at den avleser prøveblank er fordi enzymene selv har en farge som fører til at vi får en høyere absorbans enn det prøvesvaret skal ha. (2) 

Det er absorbansen til produktene som blir avlest, og dermed kan vi få en kvantitering av substratene. Formelen som blir brukt for å beregne konsentrasjonen av prøven er: 

<span style="color: #000000; font-family: 'ＭＳ 明朝','serif'; font-size: 16px;">Q: Nettoladning
 * <span style="color: #000000; font-family: 'ＭＳ 明朝','serif'; font-size: 16px;">η: **<span style="color: #000000; font-family: 'ＭＳ 明朝','serif'; font-size: 16px;">Viskositet
 * <span style="color: #000000; font-family: 'ＭＳ 明朝','serif'; font-size: 16px;">μ: **<span style="color: #000000; font-family: 'ＭＳ 明朝','serif'; font-size: 16px;">Vandringshastighet

<span style="font-family: 'Times','serif'; font-size: 16px;">Før man kan gjennomføre en enzymkatalysert konsentrasjonsmåling er det viktig at analysen er kalibrert riktig.


 * <span style="font-family: 'Times','serif'; font-size: 16px;">Referanser: **
 * 1) <span style="font-family: 'Times','serif'; font-size: 16px;"> C.A.Burtis, E.R.Ashwood, D.e. Bruns, Tietz, Fundamentals of clinical chemistry, sixth ed., Saunders Elsevier, s. 144-146
 * 2) <span style="font-family: 'Times','serif'; font-size: 16px;">Brukerhandbok for Pentrra 400