Glukose+HK-metoden

Glukose __H__exo__k__inase-metoden benytter Glukose Hexokinase som reagens for å bestemme konsentrasjonen av glukose i serum, plasma eller urin. Reagenset inneholder to enzymer, hexokinase og glukose-6-fosfat dehydrogenase, samt TRIS buffer, Mg2+, ATP og NAD. Metoden er en enzymatisk UV-metode og bygger på to sammensatte reaksjoner, der den ene blir katalysert med enzymet hexokinase og den andre med enzymet glukose-6-fosfat dehydrogenase.

  //Figur 1: Reaksjonsprinsipp for glukose HK-metoden//

1. Glukose blir fosforylert av ATP, ved tilstedeværelse av Hexokinase og Mg2+ som katalyserer reaksjonen. Det dannes glukose-6-fosfat og ADP. 2. Glukose-6-fosfat blir oksidert til 6-fosfoglukonat ved at NAD+ reduseres til NADH + H+. Reaksjonen katalyseres av Glukose-6-fosfat dehydrogenase. Mengden NADH dannet er proporsjonal med glukosekonsentrasjonen i prøven. Det er den økte absorbansen av NADH dannet, som måles ved 340 nm (UV-lys)

Glukose HK-metoden benyttes hovedsaklig for å bestemme glukosekonsentrasjonen i serum eller plasma hos mennesker. Da spesielt for å diagnostisere og/eller overvåke behandling av [|diabetes mellitus]. Metoden benyttes også til påvisning av [|idiopatisk hypoglykemi], utelukke islet cell carcinoma (kreft) i bukspyttkjertelen, samt evaluere metabolismen i ulike sykdommer. Analyse med glukose HK-metoden kan også gjøres på non-humane materialer. For eksempel testing for glukose i gjæringsprosessen. Metoden er kun designet for diagnostisk bruk in vitro.

Prøvematerialet som hovedsaklig brukes er serum eller plasma. NaF tilsatt antikoagulator som EDTA, heparin, oxalat eller citrat kan også benyttes.  Hemolyse, legemidler, bilirubin, lipider (og i liten grad triglycerider) kan føre til interferens. Derfor bør prøver hvor glukosekonsentrasjonen skal bestemmes, tas mens pasienten er fastende.  Det brukes prøveblank i analysen for å korrigere for interferens. (1) Urin kan også benyttes som prøvemateriale ved bruk av denne metoden. Normalt vil ikke friske mennesker utskille glukose med urinen, men blir det for mye glukose i blodet vil kroppen skille ut noe glukose via nyrene.

//Tabell 1: Referanseverdier for glukose i serum eller plasma hos fastende barn og voksne.//
 * || //mg/dL// || //mmol/L// ||
 * **Barn** (fastende) ||  ||   ||
 * 1-6 år || 74-127 || 4,1-7,0 ||
 * 7-19 år || 70-106 || 3,9-5,9 ||
 * **Voksne** (fastende) ||  ||   ||
 * serum/plasma || 70-115 || 3,9-6,4 ||


 * Referanser: **

1. Burtis, C.A, Ashwood, E.R., Bruns, E.D., //Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry// (6th ed.), Saunders, Missouri 2008 (side 390) 2. http://www.ehow.com/how-does_5941195_glucose-hk-work_.html (16.10.12) 3. Laboratoriehefte for Medisinsk laboratorieteknologi 2,Kvantitative teknikker. Laboratoriekurs L3 (2013). s. 25-26.