Effektiv+Separasjon

==== Effektiv separasjon innen kromatografi og elektroforese omhandler riktig innstilling av variablene for de ulike analysene, slik at det gir et mest mulig riktig resultat på kort tid. ====

==== Innen elektroforese er pH til bufferen, temperatur, vandretid og spenningen aktuelle variabler som påvirkerer separasjonen. Innstillingene av variablene vil påvirke i hvor stor grad ulike aminosyrer og proteiner vandrer gjennom systemet. Ved feilinnstilling av for eksempel pH kan prøven være for lite ionisert til å kunne skilles. ====

==== Innenfor de ulike formene for kromatografi er valg av mobil- og stasjonær fase viktig. For eksempel kan en stasjonær fase i tynnsjiktskromatografi der porene er av feil størrelse ikke inhibere elueringen nok, eller inhibere den slik at en fraksjon ikke slipper ut av kolonnen. ====

==== I tillegg har ionebytte-, væske-, adsorbsjon- og tynnsjiktskromatografi ulike variable som styrer graden av separasjon. Målet med effektiv separasjon oppnås ved å finne riktig mobil- og stasjonær fase samt innstillinger av temperatur/trykk/pH, og ikke minst tid for den enkelte prøve, som gir godt separerte og avlesbare topper. ====

==== Effektiv separasjon oppnås ved god oppløsning, som er et mål på avstanden mellom to topper (Rs > 0,8), god selektivitet, som er klart avgrensede topper (α) og effektivitet, det vil si graden av interaksjon mellom prøve og kolonnemateriale (N). I tillegg er tiden (t) viktig for at separasjonen skal være effektiv. Med høy selektivitet og effektivitet kan mindre tid gå med på å få en tilfredsstillende kurve. Eksempel på ulike kurver er vist i figur 1, med forklaringer under. ====

//figur 1: Ulik grad av separasjon//

Bildet viser: A: Dårlig oppløsning (Rs), ok selektivitet (a), dårlig effektivitet (N). B: God oppløsning (Rs) og selektivitet (a), dårlig effektivitet (N) og båndspredning (pga for lang analysetid (t)). C: Svært god oppløsning (Rs), selektivitet (a) og effektivitet (N). For lang analysetid (t). D: God oppløsning (Rs), selektivitet (a) og effektivitet (N). Tilfredstillende analysetid (t).

Kilder: Fundamentals of clinical chemistry, Tietz, 6. Ed. Saunders Elsevier, kapittel 6; s. 112-117 Forelesningsnotat: Kromatografi intro, Randi Anne Utne Holt