Bæreramfolytt

Amfolytt:
En amfolytt er en kjemisk forbindelse som både kan reagere som en syre og en base. Bæreramfolytter er amfolytter som danner en pH-gradient ved isoelektrisk fokusering.

Elektroforese:
Elektroforese er prosessen der molekyler beveger seg i et elektrisk felt, der molekylene separeres etter ladning.

pI/ Isoelektrisk punkt:
Et isoelektrisk punkt til en polyaminokarboksylsyre er det punktet i en pH verdi der molekylet ikke har ladning.

pH gradient: pH gradient er laget av bæreramfolytter hvor alle har små variasjoner i pKa verdier og molekylvekt. pH gradienten har mellom 50 og 100 bæreramfolytter som sprer seg i elektroforeseprosessen.

Teori bak elektroforese:
Bæreamfolytter i en buffer som er surere enn amfolyttens isolelektriske punkt vil ta til seg H+ og bli positiv og vandre mot katoden. Er bufferen mer basisk enn det isoelektriske punktet, gir amfolyttene fra seg H+ og blir negativ, og vandrer mot anoden. Proteiner vil oppføre seg på samme måte som amfolyttene fordi de består av ioniserbare amino-(NH2) og karboksylgrupper (COOH). Bæreamfolyttene vil bli en stabil pH-gradient når den tilsettes i mediet. De vil danne smale buffersoner med forskjellige pH verdier. Proteinene vil vandre i pH-gradienten til de finner en pH verdi som er lik sin egen pI verdi. . Bæreramfolyttene blir brukt i høye konsentrasjoner og trenger derfor høy spenning (opptil 2000volt) ved separasjon av proteinene.

Eksempel ved bruk av bæreamfolytt: Ved seperasjon av protein i elektroforese tilsettes det bæreamfolytter som oppfører seg som en pH-gradient når spenningen settes på. Bæreamfolyttene vil nå sitt isoelektriske punkt og skape en buffersone med ulike pH verdier. Proteinene vil vandre til sitt isoelektriske punkt.



Referanser:
Burtis, C.A., et al, Tietz – Fundamentals of clinical chemistry, 6th edition, s.107, Saunders Elsvevier, ISBN 978-0-7216-3865-2, 2008.